遺伝子治療の外観と、mRNAの送達技術とについて

目次

１. 【遺伝子治療の概要】

２. 【mRNA delivery】

①【遺伝子治療の概要】

・遺伝子治療の80%はウイルスを使ってる現状

[virus送達の特徴]

・大量にvirus入れると肝障害（virusは肝臓にいきいやすい）...AAV8や9.

・AAVは安全だが、同じ細胞がクローナルに増殖（癌化する危険性）

・中和抗体による作用減弱（繰り返し投与ができない）

・高い（zolgensmaなど)

・年単位での発現（関係ないところにも発現）

・4.5kbpくらいしか発現できない

[plasmid DNA/mRNAによるdelivery]

●plasmid DNA delivery
- 1990, scienceここでhotになる. (あれ, virus使わなくてもいけんじゃん)

* plasmid によるDNA送達の問題

　・細胞分裂しない限り核の中に入らない (*細胞質ならDNAでも入る)
　　ー神経細胞は細胞分裂していないから核に入らない

　・ホストゲノムへの変異誘発（potetnttial risk）

　・plasmidDNAを神経に入れようとすると入らない（核内に入らない） / mRNAは入る(transfection)

●mRNA Delivery

　ーゲノム挿入がなくて安全

　ー細胞分裂しなくても導入可能（どの細胞にも均一に入る）

・元々Dendritic cellみたいなやつに入れて細胞移植を使ってdeliverしようとしていた。

　今はlipidに入れて送達するのが主流

② mRNAdelivery

●特徴

ーapoEと結合して肝臓へ

ーカチオン性lipid は毒性があるからionizable liqiid(pH3-4)を使うようになってる

　[カチオン性lipidの毒性について]
　- LDHの漏出、ホスファチジルセリンの露出(30min)

　- caspaseの活性化

ー外側がPEG, 逆ミセルがionizable lipidとしてこのPEGと二重層的なのを形成、

　その中にmRNAを入れ込んでいる

・脂質性ナノ粒子はスクリーニングでとってくる

　ーpKaが大事

　ーtail 構造

　ーesterを入れると肝臓で分解 (肝臓で蓄積しない奴が使われている)

・課題

①肝臓への送達困難

②筋肉投与しても肝臓や脾臓にいく

　（・引き算の研究できるのでは？）

●高分子nano粒子

　ーlinear ポリエチレンイミン

　　・プロトンスポンジ効果でエンドソームが破壊される…？と言われている

　（クロライドイオンが入ってきてendsome大きくなって破裂するって考え方）

　　・in vivoでPEGが大事（PEGがないと凝集を作ってマクロファージに食われる）
　　　* in cellsではそんなことない模様.

・相補鎖mRNA oligomerの差長を長くすると

　1. 翻訳は下がる傾向

　2. 免疫が起こる傾向 (40-60mer)

[がんワクチン]

戦略１：Tumor associated antigen(TAA, ガンで比較的強く発現しているタンパク)を標的にしてmRNAによって、抗原特異てきT細胞を腫瘍に供給. TAAは、正常タンパクだけどoverexpression

　　　＊正常組織にもそのTAAがあるから免疫寛容を克服しないといけない

戦略２；ネオ抗原…免疫寛容の克服が必要ない（癌にしか発現してないもの, 遺伝子変異によって出てくるもの）

・abscopal効果：どこか体内の１カ所で免疫をつけておくと体全体の免疫がつく

【その他】

ーmRNAワクチンのgood pointは変異しても効果が保たれる点

　・ポリクロナール抗体ができるから

ーターゲットとするタンパクの範囲が広い方が(特定の配列を狙うより)変異が起きてもadjuustしやすい(modernaワクチンは運よくこちら)

ー細胞性免疫もmRNA vaccineで誘導できる（∵ 細胞内から抗体を作る）

　（がんワクチンに有用なのもこれのおかげ癌は全部細胞性免疫）

ー不活化ワクチンとかは原理上細胞性免疫が誘導されない
　　（が、起きている例もある。多分あジュバンドのせい？）

ー脂質による毒性で12-24時間後の痛みとかも出てくるのではないかと考えることもできる。多分結構炎症なり損傷なり起きている　(mRNA vaccine)

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参考文献
1.
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参考URL
<●●について>
次のURLを参考にさせていただきました。
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